क्रोमैटोग्राफिक कॉलम लाइफ कैसे बढ़ाएं?

1. ऑनलाइन फिल्टर का प्रयोग करें

इन-लाइन फिल्टर को ऑटोसैंपलर और क्रोमैटोग्राफिक कॉलम (या गार्ड कॉलम) के बीच रखा जाता है। सामान्य इन-लाइन फिल्टर स्टेनलेस स्टील के इन-लाइन फिल्टर में बदली जाने योग्य फ्रिट (0.5 माइक्रोन या 0.2 माइक्रोन) और डिस्पोजेबल PEEK के साथ विभाजित हैं। विभिन्न सामग्रियों से बने ऑनलाइन फिल्टर के लिए, आमतौर पर कॉलम फ्रिट प्लेट की तुलना में छोटे एपर्चर वाली एक छलनी प्लेट का चयन किया जाना चाहिए, ताकि उन कणों को प्रभावी ढंग से रोका जा सके जो क्रोमैटोग्राफिक कॉलम फ्रिट प्लेट को अवरुद्ध कर सकते हैं। एक बार जब यह पता चलता है कि उपकरण का दबाव बढ़ना शुरू हो गया है, तो संभव है कि इन-लाइन फिल्टर फ्रिट बंद होने लगे और हमें इसे पूरी तरह से बंद होने से पहले इसे अपडेट करना होगा।

इन-लाइन फिल्टर झिल्ली की तरह ही कार्य करते हैं, लेकिन इसके लिए किसी अतिरिक्त कार्य की आवश्यकता नहीं होती है। नमूने को सेंट्रीफ्यूज करने के बाद, यह अभी भी संभव है कि कणों की एक छोटी मात्रा उपकरण में प्रवेश करेगी, और अवशिष्ट कणों को क्रोमैटोग्राफिक कॉलम के सामने स्थित इन-लाइन फिल्टर द्वारा इंटरसेप्ट किया जा सकता है। इसके अलावा, ऑनलाइन फ़िल्टर का लाभ यह है कि यह सरल और बदलने में आसान है। आम तौर पर, इसे बदलने में केवल 5 मिनट लगते हैं, और इसे उपयोग के लिए पुनरारंभ किया जा सकता है, और इसे पुन: समायोजन या कैलिब्रेट करने में समय व्यतीत करने की आवश्यकता नहीं होती है। एक और फायदा यह है कि इन-लाइन फिल्टर उपकरण में कुछ हिस्सों के उम्र बढ़ने और आंसू से उत्पन्न कणों को भी फ़िल्टर कर सकता है। मैं इस बात की पुरजोर वकालत करता हूं कि हर लिक्विड फेज इंस्ट्रूमेंट एक इन-लाइन फिल्टर से लैस हो। यदि गार्ड कॉलम का उपयोग किया जाता है, तो भी मैं गार्ड कॉलम से पहले एक इन-लाइन फ़िल्टर स्थापित करने की सलाह देता हूं।

2. गार्ड कॉलम का प्रयोग करें

एक गार्ड कॉलम क्रोमैटोग्राफिक कॉलम के सामने स्थापित एक छोटा क्रोमैटोग्राफिक कॉलम है। यह आम तौर पर 1-2 सेमी लंबा होता है, और पैकिंग को इस्तेमाल किए गए कॉलम की पैकिंग के साथ मिलान किया जाता है, और इस्तेमाल किए गए फ्रिट का पोर आकार कॉलम में इस्तेमाल किए गए फ्रिट से बड़ा नहीं होता है। गार्ड कॉलम के दो कार्य हैं: (1) यह उन कणों को ब्लॉक कर सकता है जो कॉलम को ब्लॉक कर सकते हैं; (2) क्योंकि गार्ड कॉलम और कॉलम पैकिंग का मिलान किया जाता है, कोई भी रासायनिक अशुद्धता जो बिना पीकिंग के कॉलम पैकिंग के साथ अपरिवर्तनीय रूप से बातचीत कर सकती है, पहले गार्ड कॉलम द्वारा कैप्चर की जाएगी।

गार्ड कॉलम का उपयोग निश्चित रूप से कॉलम के जीवन को बढ़ा सकता है। हालांकि, गार्ड कॉलम का उपयोग करने पर विचार करने से पहले, निम्नलिखित बिंदुओं का मूल्यांकन करने की अनुशंसा की जाती है:

(1) गार्ड कॉलम सस्ता नहीं है, इसलिए विचार करें कि क्या गार्ड कॉलम को खरीदने की लागत की भरपाई कॉलम के जीवन में वृद्धि से की जा सकती है;

(2) गार्ड कॉलम का जीवन कब तक है? यह ध्यान देना आवश्यक है कि कब गार्ड कार्ट्रिज को बदलने की आवश्यकता है, ताकि क्रोमैटोग्राफिक कॉलम को दूषित न करें क्योंकि प्रतिस्थापन बहुत देर हो चुकी है;

(3) गार्ड कॉलम को कैसे फ्लश करें? फ्लशिंग करते समय, गार्ड कॉलम में जमा अशुद्धियों को क्रोमैटोग्राफिक कॉलम में फ्लश करने से बचने के लिए गार्ड कॉलम और क्रोमैटोग्राफिक कॉलम को अलग से धोना पड़ता है;

(4) 1-2 सेमी गार्ड कॉलम जोड़ने के कारण कॉलम दक्षता में वृद्धि की अपेक्षा न करें। हालांकि गार्ड कॉलम स्थापित करना कॉलम की लंबाई बढ़ाने के समान है, गार्ड कॉलम के उपयोग से दो कनेक्टर और कनेक्टिंग पाइप भी जुड़ते हैं, जिससे इंस्ट्रूमेंट सिस्टम की कॉलम दक्षता कम हो जाएगी, इसलिए यह अच्छा होगा कि बिना गार्ड के कॉलम की दक्षता हो। कॉलम बनाए रखा जा सकता है।

कहने की जरूरत नहीं है कि गार्ड कॉलम का उपयोग निश्चित रूप से कॉलम लाइफ को बढ़ा सकता है, लेकिन यह अनुशंसा की जाती है कि प्रत्येक प्रयोगशाला अर्थशास्त्र और प्रयास के संदर्भ में गार्ड कॉलम की आवश्यकता का मूल्यांकन करे। गार्ड कॉलम के साथ भी, मैं गार्ड कॉलम और ऑटोसैंपलर के बीच एक इन-लाइन फिल्टर लगाने की सलाह दूंगा, क्योंकि इन-लाइन फिल्टर को बदलना गार्ड कॉलम को बदलने की तुलना में सस्ता है और गार्ड कॉलम और कॉलम दोनों के जीवन को बढ़ाता है। .

3. अनुपचारित नमूने दर्ज न करें

पूर्व-उपचार के साथ या बिना, यह अनुशंसा की जाती है कि इंजेक्शन से पहले सभी नमूनों को फ़िल्टर या सेंट्रीफ्यूज किया जाए। उदाहरण के लिए, जब कणों को हटाने के लिए एक फिल्टर झिल्ली के माध्यम से नमूना को फ़िल्टर किया जाता है और इस तरह क्रोमैटोग्राफिक कॉलम के फ्रिट के क्लॉगिंग को कम करता है, तो फिल्टर झिल्ली का छिद्र आकार क्रोमैटोग्राफिक कॉलम के फ्रिट के पोर आकार से छोटा होना चाहिए। आम तौर पर, 3 माइक्रोन से बड़े कणों वाले क्रोमैटोग्राफिक कॉलम 2 माइक्रोन फ्रिट का उपयोग करते हैं, 3 माइक्रोन कणों वाले क्रोमैटोग्राफिक कॉलम 0.5 माइक्रोन फ्रिट का उपयोग करते हैं, और 3 माइक्रोन से छोटे कणों वाले कॉलम आमतौर पर 0.2 माइक्रोन का उपयोग करते हैं। फ्रिट, इसलिए सामान्य 0.45 माइक्रोन फिल्टर मूल रूप से उप-2 माइक्रोन कणों को छोड़कर सभी क्रोमैटोग्राफिक कॉलम में उपयोग किए जा सकते हैं; उप-2 सुक्ष्ममापी कणों वाले स्तंभों के लिए, 0.2 सुक्ष्ममापी छिद्रों वाले फिल्टर आमतौर पर उपयोग किए जाते हैं। अधिकांश फिल्टर झिल्लियां पहले से पैक की जाती हैं और इन्हें छानने के लिए सिरिंज से सीधे जोड़ा जा सकता है या 96-वेल प्लेट में फिल्टर प्लेट के रूप में उपयोग किया जा सकता है।